Resumen Los polimorfismos presentes en los microsatélites de la región 3’UTR del gen SLC11A1 de los rumiantes fue asociada a la resistencia natural a la infección por Brucella spp. y Mycobacterium spp., aunque su relevancia en la prevención de la brucelosis bovina es controversial. El objetivo de este estudio fue reevaluar el rol de esos polimorfismos frente a una infección por B. abortus en bovinos de razas europeas. Inicialmente se utilizó la presencia o ausencia de anticuerpos específicos anti B. abortus en bovinos de carne (n=74) o leche (n=69) con alto riesgo de infección natural para identificar animales susceptibles (casos, infectados) o resistentes (controles, no infectados) a la infección. Posteriormente, la resistencia innata a la infección por B. abortus fue evaluada en macrófagos derivados de monocitos sanguíneos (MDMs) desafiados con la bacteria. Finalmente, se realizó un análisis bioinformático de la porción 3’UTR del gen SLC11A1 para evaluar el impacto funcional en la regulación del gen. Se genotiparon por electroforesis capilar – PCR multiplex para ambos microsatélites, 54 animales serológicamente positivos y 89 negativos a brucelosis. Nuestros resultados mostraron que los genotipos 159 y 175 para los Ms1 y Ms2 respectivamente, previamente definidos como “resistentes”, fueron los más frecuentes entre la población estudiada. Independientemente de esto, no se detectó asociación entre estos u otros polimorfismos con la ausencia o presencia de respuesta inmune humoral a Brucella. Tampoco se observó asociación entre los genotipos resistentes y el fenotipo de crecimiento de B. abortus en MDMs. El análisis in silico de la secuencia 3’ UTR predijo dos sitios de unión canónicos para elementos reguladores transcripcionales pertenecientes a las familias TEF-1 y SMAD, además de indicar que la estructura secundaria de esa porción génica permanecía inalterable independientemente de la extensión de los microsatélites. En conjunto, estos resultados indican una falta de asociación entre los polimorfismos en la porción 3’UTR del gen SLC11A1 y la resistencia natural a la brucelosis en los bovinos de origen europeos.

Abstract In ruminants, polymorphisms in microsatellites at 3´untranslated region (3´ UTR) of the SLC11A1 gene were associated with natural resistance to Brucella spp. and Mycobacterium spp. infection, but its relevance to prevent brucellosis is controversial in cattle. The aim of this study was to re-evaluate the role of these polymorphisms in the outcome of Brucella abortus infection in European bovine breeds. Initially, the presence or absence of specific antibodies against Brucella abortus in beef (n=74) or dairy (n=69) Bos taurus cattle at high risk of natural Brucella infection was used to identify susceptible (cases, infected) or resistant (control, non-infected) animals. Then, innate resistance to Brucella infection was evaluated in B. taurus peripheral blood monocyte-derived macrophages (MDMs) challenged with the pathogen. Finally, a bioinformatics analysis of the 3′ UTR of the SLC11A1 gene was performed to evaluate its putative functional impact on gene regulation. Fifty four (54) brucellosis positive and 89 brucellosis negative animals were genotyped for both microsatellites by multiplex PCR-capillary electrophoresis. Our results showed that the homozygous genotypes 159 and 175 for Ms1 and Ms2 respectively, previously defined as “resistant” genotypes, were the most frequent among the animal population. Independently, no association was detected between these or other polymorphisms and the absence or presence of humoral immune response against brucellosis. Moreover, no association was observed between the resistant genotype with the restricted B. abortus-intracellular growth phenotype in MDMs. In silico analysis of 3′ UTR sequence predicted two canonical binding sites for transcriptional regulatory elements belonging to TEF-1 and SMAD families, but most importantly, the secondary structure of the 3’UTR remains unchanged regardless of the length of the microsatellites. Taken together, these results show no evidence of an association between the 3’UTR SLC11A1 polymorphisms and natural resistance against brucellosis in cattle.

A prevalência de Trichinella spiralis, Leptospira spp. e Salmonella spp. foi estudada em ratos e gambás que habitam granjas avícolas da região de Exaltación de la Cruz, Buenos Aires, Argentina, com o objetivo de determinar o potencial risco sanitário para pessoas que ficam em contato com esses animais. O estudo foi realizado entre a primavera de 1999 e o inverno de 2001 em 48 granjas avícolas. O estudo em gambás iniciou-se no inverno de 2000. Foram capturados 152 Rattus norvegicus, 3 Rattus rattus, 16 Didelphis albiventris e 1 Lutreolina crassicaudata. Registrou-se a presença de ratos e de gambás em 70% e 27% das granjas estudadas, respectivamente. A percentagem de granjas com ratos foi independente da presença ou da ausência de suínos. Não foi detectada a presença de Leptospira spp. e de Trichinella spiralis em nenhum animal avaliado. Foi detectada, porém, a presença de Salmonella Enteritidis em um Rattus norvegicus e em um Didelphis albiventris. Nas condições em que esse estudo foi realizado, os nossos resultados indicam que ratos e gambás que habitam granjas avícolas não constituem um fator de risco na transmissão de Trichinella e de Leptospira. A detecção de Salmonella Enteritidis tanto em ratos quanto em gambás, porém, sugere a necessidade de aplicar medidas profiláticas em granjas avícolas para maior controle desse agente.

We have studied the prevalence of Trichinella spiralis, Leptospira spp. and Salmonella spp. in rats and opossums that inhabit poultry farms of Exaltación de la Cruz, Buenos Aires, Argentina, to determine the potential sanitary risk for humans that are in contact with these animals. The study was carried out on 48 poultry farms between spring 1999 and winter 2001. The study of opossums began in winter 2000. During the study period we captured 152 Rattus norvegicus, 3 Rattus rattus, 16 Didelphis albiventris and 1 Lutreolina crassicaudata. We have registered the presence of rats and opossums in 70% and 27% of the studied farms, respectively. The percentage of farms with rats was independent of the presence or absence of pigs. We did not detect the presence of Leptospira spp. and Trichinella spiralis in any individual. We detected the presence of Salmonella Enteritidis in one Rattus norvegicus and one Didelphis albiventris. According to our results, the rats and opossums of poultry farms may not report a risk factor in the transmission of Trichinella and Leptospira under the present conditions; but the detection of Salmonella Enteritidis in rats as well as in opossums suggests the idea of applying prophylactics measurements on poultry farms.

Foram capturados 41 camundongos (Mus musculus) na região urbana, próximo à ferrovia da cidade de Santa Fé, Argentina. Os rins de cada animal capturado foram removidos para estudos bacteriológicos e histológicos. Um dos rins foi imerso em meio semi-sólido de Fletcher para isolamento de leptospiras, as quais foram serologicamente tipificadas. O outro rim foi microscopicamente examinado por coloração de cortes histológicos pela hematoxilina-eosina, impregnação pela prata e imunohistoquímica. Leptospiras pertencentes ao serogrupo Ballum foram isoladas em 16 (39%) das 41 amostras availadas. A presença do agente foi observada em 18 (44%) e 19 (46%) das 41 amostras avaliadas por impregnação pela prata e imunohistoquímica, respectivamente. Leptospiras foram detectadas em grande numero na superfície apical das células epiteliais e no lumen dos túbulos medulares e foram menos frequentemente encontradas na superficie apical de células epiteliais ou no lúmen dos túbulos corticais, o que é considerado achado raro em animais portadores. Lesões microscópicas consistindo de nefrite mononuclear intersticial focal, atrofia glomerular e descamação das células tubulares epiteliais foram observadas em 13 dos 19 animais infectados e em 10 dos 22 animais não infectados. Não houve diferença estatisticamente significativa entre presença de lesões em animais infectados e não infectados (P=0,14). As três técnicas empregadas, isolamento, impregnação pela prata e imunohistoquímica, apresentaram alta concordância (k³0,85) e não apresentaram diferenças estatisticamente significativas (P>0,05). Esse trabalho descreve a presença incomum de leptospira em rins de animais portadores, porém com esse estudo não foi possível estabelecer uma relação entre lesões e presença de leptospira.

Forty-one wild house mice (Mus musculus) were trapped in an urban area, near railways, in Santa Fe city, Argentina. Both kidneys from each mouse were removed for bacteriological and histological examination. One kidney was inoculated into Fletcher semi-solid medium and isolates were serologically typed. The other kidney was microscopically examined after hematoxylin-eosin, silver impregnation and immunohistochemical stains. Leptospires, all of them belonging to the Ballum serogroup, were isolated from 16 (39%) out of 41 samples. The presence of the agent was recorded in 18 (44%) and in 19 (46%) out of 41 silver impregnated and immunohistochemically stained samples respectively. Additionally, leptospires were detected in high number on the apical surface of epithelial cells and in the lumen of medullary tubules and they were less frequently seen on the apical surface of epithelial cells or in the lumen of the cortical tubules, which represents an unusual finding in carrier animals. Microscopic lesions consisting of focal mononuclear interstitial nephritis, glomerular shrinkage and desquamation of tubular epithelial cells were observed in 13 of 19 infected and in 10 of 22 non-infected mice; differences in presence of lesions between infected and non-infected animals were not statistically significant (P=0,14). The three techniques, culture, silver impregnation and immunohistochemistry, had a high agreement (k³0.85) and no significant differences between them were detected (P>0.05). In addition, an unusual location of leptospires in kidneys of carrier animals was reported, but a relationship between lesions and presence of leptospires could not be established.